细胞表面受体在将细胞外信息传递到细胞内部的过程中起着至关重要的作用。通过设计这种相互作用的亲和力或动力学,可以研究决定生物效应的机制。最近,酵母展示已被用于提高稳定性和/或亲和力的T细胞受体(TCR)工程。vwin提供最全面的酵母展示相关服务组合,包括基于酵母展示的T细胞受体工程。
T细胞受体和抗体
αβ异二聚体T细胞受体(TCR)识别肽抗原,这些肽抗原作为复合物与主要组织相容性复合物(MHC)编码的蛋白质传递到细胞表面。因此,T细胞已经进化出一种策略来感知这些细胞内抗原,并通过消除抗原呈递细胞(如病毒感染的细胞)或通过分泌因子将免疫系统招募到抗原部位来作出反应。T细胞受体和抗体可以识别不同种类的配体。抗体作为膜结合蛋白和可溶性蛋白与可溶性抗原结合,而TCR仅作为膜结合分子与细胞相关肽MHC抗原结合。
利用酵母展示的T细胞受体工程
酵母展示为工程化高亲和力蛋白质提供了一个高效的系统通过荧光标记配体和荧光激活细胞分选(FACS)。最近,酵母展示已被用于提高稳定性和/或亲和力的T细胞受体(TCR)工程。在酵母展示系统中,TCR被克隆为Vβ-连接子-Vα单链(scTCR),与酵母细胞表面蛋白Aga2的基因融合。这种融合结构将展示在酵母细胞的表面上,在那里它是可接受的体外与肽MHC配体结合的高亲和力工程。
图1。酵母表面显示的scTv片段图。描述了具有N-末端HA标签和C-末端C-myc的scTv片段。scTv构建体表达为与AGA-2酵母交配蛋白的N端融合,后者在酵母细胞表面与AGA-1形成共价键。可通过针对标签(HA或c-myc)的抗体或针对scTv可变结构域的抗体(Smith)监测构建物的表达等, 2015).
基于酵母展示的T细胞受体工程的简要步骤如下:
1) 2C-TCR基因的随机突变与表达
2) 应用流式细胞术筛选突变体TCR
3) 每个细胞的TCR估计
4) 肽MHC功能结合试验
如上所述,通过组合文库筛选,已证明酵母表面展示系统可用于T细胞受体的基因工程。凭借多年丰富的经验和先进的技术,Creative Biolabs的科学家愿意基于我们传奇的酵母展示平台,为我们的全球客户提供T细胞受体工程服务,该平台可以改善您的结果并节省您的研究时间。vwin
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参考
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