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scfv/fab施工

vwin为超临界流体汽车和工厂建设搭建了坚实的平台。有三种途径可以使scfv或fab靶向特定抗原。第一种方法是产生小鼠杂交瘤克隆体,然后将全IgG(或IgM)转化为SCFV或FAB;第二种方法是创建免疫噬菌体显示scfv或fab小鼠库,然后利用抗原对文库进行筛选;第三种方法是利用抗原筛选出一个预先制备的scfv或fab抗体噬菌体展示库(通常为人库),直接获得scfv或fab克隆。我们还可以将鸡的IgY转化为scfv或fab片段。

scfv/fab施工

Fab片段不同于scfv片段,因为它们包含可变域和恒定区域,因此,它们的构造和最终表达有些复杂。vwin是具有多年抗体生产经验的专家。同样的重链和轻链也可用于超临界流体动力装置的建造。

如果有单克隆抗体,Fab片段可以用酶法创建。木瓜蛋白酶是一种半胱氨酸蛋白酶,具有内肽酶活性,以铰链的形式切割免疫球蛋白G分子。这种分裂产生了3个约50kDa的片段,两个fab域和一个fc域。木瓜蛋白酶消化抗体不能促进凝集,降水量,调理作用,裂解。固定化木瓜蛋白酶具有产生FAB和FC片段的优点,不需要在消化后去除木瓜蛋白酶。

表达策略:
-分泌性表达e.大肠杆菌.
-可溶性表达e.大肠杆菌.
-作为包涵体的不溶性表达。
-相扑融合平台。

净化策略:
-亲和力标记:六组氨酸(his6)标记。
-分子形式:将相扑插入His6标记和感兴趣蛋白(POI)之间。
-纯化:IMAC(固定化金属亲和色谱法)。
-纯化后去除标记:用相扑蛋白酶在相扑C端断裂。




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