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抗体亲和力成熟

亲和力成熟是提高抗体对抗原亲和力的过程。体内,免疫系统通过体细胞过度突变和克隆选择进行自然亲和成熟。体外,在实验室亲和力成熟过程中,可以通过突变和选择获得。

vwin在抗体亲和力成熟方面积累了丰富的经验。在亲和力成熟过程中,我们通常采用单链抗体作为抗体形式。也,在抗原结合筛选过程中,采用单价显示噬菌体系统来降低亲和力效应。我们还提供单域抗体亲和成熟服务.两种方法,非靶向突变和寡核苷酸定向突变,用于构建随机或定义的子库,引入大量的原抗体突变体。然后通过增加筛选强度来选择亲和力较高的抗体结合物。通过构建一系列scfv/fab抗体的子库,我们的专利协议允许将scfv抗体的亲和力从10提高到10。- 9到10- 10.我们成功地获得了一种SCFv抗体,其亲和力极高,为10。- 12,其与抗原的结合基本上是不可逆的。

非目标突变

抗体亲和力成熟

我们使用一种容易出错的PCR整合DNA重组方法,在子库构建期间主要对cdr区域进行突变。如果将免疫原性突变引入框架位置的可能性不值得关注,我们通常使用这种方法在整个V区的完全随机位置产生突变。HVL碎片。在这些情况下,子库的遗传多样性通过我们专有的细菌突变株进一步增加,CD-AFI

寡核苷酸定向突变

如果抗体/抗原复合物的结构可用或抗体/抗原的结构可以建模,某些位置可按规定的多样性随机化(如全部20个氨基酸的全随机化或以固定百分比选择的氨基酸的偏倚随机化),以提高亲和力。我们能够利用Trimer密码子技术创建任何子库来合并定义的突变。大部分时间,我们需要研究抗体的aa序列,找出保守序列(与生殖系和抗体亚家族序列比较)。然后我们可以将突变引入不保守的框架结构区域的位置。据称,这些区域具有抗原特异性,这些区域的变化可能不会增加免疫原性。

噬菌体展示抗体库筛选

随后的文库筛选将筛选出具有高亲和力的抗体突变体。有两种图书馆筛选策略。在第一个“表面平移”策略中,降低抗原浓度是表面固定的。在第二个“解决方案排序”策略中,使用溶液中的标记抗原,我们有两种方法,基于平衡常数(kd)的选择和基于结合动力学的选择。在第一种方法中,亚库噬菌体在控制浓度下与生物素化抗原孵育,结合的噬菌体被固定化的中性粒细胞捕获。基于结合动力学的选择也被称为偏离率(koff)选择,允许噬菌体群在未标记抗原的大摩尔过量添加到混合物中并控制一段时间之前使标记抗原饱和。这就允许选择突变抗体的速度较慢。由于koff的减少通常导致更高的亲和力,这种选择方法挑选出抗体变异与改进的kd。

抗体亲和力测定

我们为抗体结合动力学分析提供双核分析服务。我们通常在芯片上捕获抗体,然后在捕获的抗体上运行抗原。每种抗体在6种不同浓度下进行抗原测定,并对每种抗原浓度获得的结合常数进行卡方分析。文件包将包括实时收费(kA)。关断率(KD),亲和常数(kd)卡方值和实时结合动力学图。我们希望获得约50 ul的1 mg/ml抗原和抗体溶液。我们需要约100 ug的抗原和约50 ug的抗体。我们也需要有关抗原的分子量信息。可能需要特别考虑重复或多个表位抗原的亲和力测定。>>进一步了解抗体亲和力测量服务

肽亲和成熟

丙氨酸扫描诱变是肽结合物亲和成熟的常用方法。在这种方法中,所选结合肽的每一个a a将被丙氨酸取代,然后利用双核技术分析修饰肽与靶蛋白的结合。非必需的原子吸收光谱将被明确识别。之后,我们将创建一个定向/约束肽子库,其中包含非必需AA位置上的随机序列。在这里,再一次,我们经常使用“nnk”或“trimer-codon”策略随机化非必需残基。结合亲和力增强的突变体通过增强筛选的严格性来鉴定。接下来是噬菌体酶联免疫吸附试验。




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