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细胞系亲和力测量

来自Creative Biolavwinbs的科学家愿意使用表面等离子体共振显微镜(SPR显微镜)提供定制的细胞系亲和度测量。它是一种最新的无标记技术,结合了SPR和电子显微镜的优点,在实时监测中研究活细胞的配体-受体相互作用。

在技术上,膜蛋白与活细胞的结合动力学的测量具有挑战性。传统的方法,如基于荧光的技术,是一种基于标签的终点分析,在不获得结合动力学的情况下,测量结合前后荧光信号的变化。然而,SPR等无标记技术可以通过将纯化蛋白固定在SPR芯片上来测量蛋白结合动力学。但对于膜蛋白,必须引入两亲性脂质双分子层,以保持膜蛋白嵌入脂质体以保持其活性。同时,原子力显微镜可以为膜蛋白的研究提供较高的空间分辨率,但不适用于结合动力学的研究。

如今,表面等离子体共振显微镜(SPRM)是一种无标记成像方法,可以在不从活细胞中提取膜蛋白的情况下对同一样品进行光学和荧光成像。简单地说,首先将细胞培养在金膜上,将其置于倒置显微镜中,同时进行亮场、荧光和SPRM成像。然后,将p偏振激光束通过油浸物镜投射到镀金玻璃罩上,在黄金介质表面形成SPR,由CCD相机成像。此外,使用汞灯和适当的光学滤光片进行表观荧光测量。此外,同一样品的传统亮场图像也可以通过样品顶部的光照来获取。

图1所示。表面等离子体共振显微镜图1所示。表面等离子体共振显微镜

像传统的SPR方法一样,配体结合可以导致靠近表面的质量浓度的变化。因此,缔合常数(K一个),解离常数(Kd)和结合亲和力(KD)可以从信号响应单元(RU)的变化确定。

SPR显微镜能够测量单个活细胞中配体和受体之间的结合动力学。利用数学模型对传感器图进行逐像素拟合,绘制出局部关联和分离常数。因此,可以以非侵入的方式获得配体与细胞相互作用的实时分布图像,从而了解感兴趣分子的动态特性。

图2。同一细胞的SPR显微镜图像和免疫荧光图像图2。同一细胞的SPR显微镜图像和免疫荧光图像

vwinCreative Biolabs还提供膜蛋白研究,使用人工双分子层来保持膜蛋白在其天然结构中。相比之下,非原位, SPR显微镜使直接原位对配体-受体相互作用的检测更准确。因此,SPR显微镜在发现药物,包括单克隆抗体和以膜蛋白为靶点的小分子药物方面具有巨大的潜力。徳赢

参考文献

  1. 王伟,杨勇,王胜,等。膜蛋白结合动力学的研究进展[J]。化学性质, 2012, 4(10): 846-853。
  2. 王志强,王志强,王志强,等。膜蛋白固定化技术的研究进展[J]。化学评论, 2010, 111(2): 640-656。

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