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抗体亲和力测定

无标记相互作用分析对研究生物分子间的相互作用具有重要意义。来自创新生物实验室的科学家能够利vwin用最先进的双核技术进行抗体亲和力和动力学测量。蛋白质,八位字节系统,等。这些系统主要基于光学现象技术-表面等离子体共振(SPR)和生物层干扰(BLI)。它能够以实时监测的方式直接检测和测量分子间的相互作用。

SPR是通过传感器芯片跟踪信号变化来检测分子间相互作用的一种非常敏感的方法。SPR信号定义为折射率变化,这意味着响应单位(ru)大约等于1pg/mm2下蛋白质的表面浓度。在两个分子之间的相互作用过程中,绘制随时间变化的SPR信号会产生传感器图,可以实时可视化(图1)。一般绑定响应包括三个阶段:关联平衡和解离;将这些传感器图数据与数学模型相匹配,科学家可以计算关联(kA)和离解(kD)速率常数,并最终确定结合亲和力(kD)。与基于平衡点测定抗体结合亲和力的恒温量热法(ITC)不同,SPR可以获得完整的动力学参数来评价结合、解离以及抗体亲和力的所有影响。

抗体亲和力测定图1。SPR成像过程

在抗体亲和力测定中,将高亲和力抗体固定在传感器芯片表面,首先捕获待分析抗体。然后在表面依次注射一系列浓度的抗原。根据传感器曲线,人们可以根据动力学参数对抗体进行排序,并选择最符合你偏好的单克隆抗体。与发现紧密结合抗体相比,徳赢由于结合亲和力可以通过标准的蛋白质工程方法成熟,因此特异区(表位)的鉴定在药物发现中具有更大的前景。徳赢因此,基于二价分析物模型,指两种结合反应,我们能够提供侦察分析,以确定抗体结合到两个不同的抗原表位。首先,一种通用抗体(如兔抗鼠免疫球蛋白)共价地附着在芯片表面,然后,第一个抗体被先前附着的通用抗体捕获。在不饱和部位堵塞后,注入的抗原将由第一个抗体结合形成ab-ag复合物。随后,给药第二种单克隆抗体,用于评估结合亲和力,如果第二个抗体结合到一个不同的表位,将观察到一个独特的传感器图曲线。(图2)

抗体亲和力测定图2。表位映射的主要步骤。①第一次抗体捕获。②封堵不饱和场地。③与抗原相互作用。④用第二抗体导入⑤冲洗再生

vwin创新的生物实验室可以提供定制的抗体亲和力测量,而且任何分子间的相互作用(分子质量不小于100)都可以不加标记地实时测定。所有数据分析将被执行并记录下来。请随时联系我们获取详细报价。

参考文献:
阿布迪赫Yasmina N.等。“使用octet探索阻断分析,蛋白质,以及双核生物传感器。”分析生物化学386.2(2009):172-180.
衷心的,史蒂芬Paul Leonard还有理查德·奥肯尼迪。使用表面等离子体共振测量抗体-抗原结合动力学。”抗体工程:方法和方案,第二版(2012):411-442。




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