与噬菌体展示相比,酵母展示具有真核表达、利用FACS分选技术选择性分离不同亲和水平群体、FACS方便检测抗原结合等特点,使酵母成为发现新型抗体的强大而高效的工具。徳赢凭借多年的丰富经验,vwin开发并商业化了以酵母展示技术为基础的一系列创新集成服务,包括库构建与筛选、抗体亲和成熟、特异性单克隆抗体生产等。
什么是酵母展示?
酵母展示(或酵母表面展示)是一种特别强大的蛋白质工程技术,它利用重组蛋白的表达整合到酵母的细胞壁来分离和制造抗体。自2000年首次发表以来,酵母表面显示已被广泛用于设计各种蛋白质,以提高亲和力、特异性、表达、稳定性和催化活性。随着这项技术的不断改进,酵母展示的应用现在包括酶工程;蛋白质表位定位,蛋白质相互作用的鉴定,免疫生物催化和生物传感器,蛋白质和酶在酵母细胞上的生物技术和生物医学应用的展示。
酵母显示系统
酵母文库是由编码蛋白质变异的潜在遗传物质产生的。酵母为细胞表面锚定蛋白提供多种选择,包括Agα1p, Aga2p, Cwp1p, Cwp2p, Tip1p, Flo1p, Sed1p, YCR89w和Tir1。感兴趣的蛋白融合到锚定蛋白的C端或n端通常会导致融合蛋白在细胞表面的显示酿酒酵母或毕赤酵母属pastoris.
图1。酿酒酵母细胞表面显示系统。(a) α-凝集素显示系统;(b) a-凝集素基显示系统;(c) flo1p显示系统;(d) Yps1p的锚定域膜显示系统(Kuroda and Ueda, 2013)。
感兴趣的蛋白的功能显示可以通过荧光标记抗体或配体特异性的天然折叠检测。表位标记通过标记的抗ha或抗c-myc抗体将蛋白质功能正常化到表面表达水平。这些特性允许流式细胞仪对酵母细胞的异质混合物进行分选,根据所显示的蛋白质的生物物理和生化特性,每个细胞显示一个蛋白质变体的10万份拷贝。
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参考
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