vwin已为SCFV和Fab施工建立了一个坚实的平台。有三条路线具有特定抗原的SCFV或Fab。第一种方法是产生小鼠杂交瘤克隆,然后将全IgG(或IgM)转化为SCFV或Fab;第二种方法是产生免疫噬菌体展示SCFV或Fab小鼠库,然后使用抗原筛分图书馆;第三种方法是使用抗原筛选产后SCFV或Fab抗体噬菌体展示文库(通常是人类),直接得到SCFV或Fab克隆。我们还能够将鸡IGY转换为SCFV或Fab碎片。
Fab片段与SCFV不同,因为它们包含可变域和恒定区域,因此它们的结构和最终表达式更复杂。vwin是具有多年抗体生产经验的专家。用于SCFV结构的相同的重和可变链接可用于锻造工厂。
如果可用单克隆抗体,则可以酶促产生Fab片段。木瓜蛋白酶是一种半胱氨酸蛋白酶,具有内肽酶活性以铰接原因切割免疫球蛋白G分子。这种裂解导致产生三〜50kda片段,两个fab结构域和Fc结构域。木瓜蛋白酶消化的抗体不能促进凝集,沉淀,调理和裂解。固定的木瓜蛋白质提供了产生Fab和Fc片段的优点,而无需在消化后未能去除蛋白酶。
表达策略:
- 在周质的分泌表达大肠杆菌。
- 可溶性在细胞质中的表达大肠杆菌。
- 不溶性表达作为包涵体。
- Sumo Fusion平台。
净化策略:
- 亲和标签:六角素(HIS6)标签。
- 分子形式:在His6标签和感兴趣的蛋白质之间插入SUMO(POI)。
- 纯化:IMAC(固定化金属亲和色谱)。
- 纯化后的标签去除:用SUMO蛋白酶的SUMO的C末端切割。
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