亲和力成熟是提高抗体对抗原的亲和力的过程。体内，免疫系统的天然亲和力成熟通过各体化的高级抵抗和克隆选择来进行。体外在实验室亲和力成熟中，可以通过突变和选择获得。
vwin在抗体亲和力成熟方面积累了丰富的经验。在亲和成熟过程中，我们通常以scFv作为抗体格式。此外，一种单价显示噬菌体系统被用来减少抗原结合筛选过程中的贪婪效应。我们还提供单域抗体的亲和成熟服务。使用两种方法，未确定的诱变和寡核苷酸定向诱变，用于构建随机或定义的子文库以引入原始抗体的大量突变体。然后通过增加筛选严格性来选择较高亲和力的抗体粘合剂。通过构建SCFV / Fab抗体的一系列亚文库，我们的专有协议允许增加SCFV抗体从10的亲和力－9到10.-10。我们已成功获得SCFV抗体，其具有极高的亲和力10-12，其与抗原的结合基本上是不可逆转的。
没有针对性诱变
在子图书馆建设期间，我们使用易于PCR集成的DNA混合方法主要突变CDR区域。如果将免疫原性突变引入框架位置的可能性不是问题，我们通常使用这种方法在整个V的完全随机位置处创建突变H和VL.碎片。在这些情况下，通过我们专有的细菌突变菌株CD-affi™传代，子库的遗传多样性进一步增加。
寡核苷酸导向诱变
如果抗体/抗原的结构复杂的可用或抗体/抗原的结构建模是可行的,特定位置可以随机定义的多样性(如完全随机化与所有的20种氨基酸或有偏见的随机化与选定氨基酸以固定百分比)提高亲和力。我们能够使用三聚体密码子技术创建任何子库来合并定义的突变。大多数时候，我们需要研究抗体的AA序列来找出保守序列(与种系和抗体亚家族序列比较)。然后，我们可以在框架区域中不保守的位置引入突变。据推测，这些区域将是抗原特异性的，这些区域的改变可能不会增加免疫原性。
噬菌体展示抗体库筛选
随后的文库筛选将捕获具有高亲和力的抗体突变体。有两种图书馆筛选策略。在第一个“表面平移”策略中，降低抗原浓度是固定的。在第二“解决方案分选”策略中，在使用溶液中的标记抗原，我们具有两种方法，基于平衡常数（KD）和基于结合动力学的选择。在第一种方法中，将子文库噬菌体与在受控浓度下的生物素化抗原一起温育，并通过固定的中性杀素捕获结合的噬菌体。基于结合动力学的选择也被称为偏移（koff）选择，其中允许噬菌体种群在将抗原过量的未标记过量的未标记抗原添加到控制的时间内之前使标记的抗原饱和。这允许选择具有较慢的速率较慢的突变抗体。由于koff的减少通常导致更高的亲和力，因此该选择方法单独用改善的Kd单打抗体变体。
抗体亲和力测量
我们提供Biacore Analysis服务，用于抗体的结合动力学分析。我们通常在芯片上捕获抗体，然后在捕获的抗体上运行抗原。每一种抗体将在6种不同浓度下运行抗原，并对从每种抗原浓度获得的结合常数进行卡方分析。该文档包将包括实时速率(Ka)、速率(Kd)、亲和常数(Kd)、卡方值和实时绑定动力学图。我们希望获得约50 uL的1 mg/mL抗原和抗体溶液。我们需要大约100毫克的抗原和大约50毫克的抗体。我们也需要抗原的分子量信息。可能需要特别考虑具有重复或多个表位的抗原，以进行亲和力测定了解有关抗体亲和力测量服务的更多信息
肽亲和力成熟
丙氨酸扫描诱变是我们最喜欢的方法在亲和成熟的肽结合物。在这种方法中，将选择的结合肽的每一个AA替换为丙氨酸，然后用Biacore技术检测修饰后的肽与目标蛋白的结合情况。非必要的AAs将被特别指明。之后，我们将创建一个定向/约束肽子库，在非必需的AA位置上包含随机序列。这里，我们经常使用“NNK”或“三聚体密码子”策略随机化非必需的残基。通过增强筛选的严格性，鉴定结合亲和力增强的突变体，然后进行噬菌体ELISA。
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