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抗体亲和力测量

无标记相互作用分析对科学家研究生物分子间的相互作用具有重要意义。Creative Biolabsvwin的科学家可以使用最先进的Biacore、ProteOn、Octet等系统进行抗体亲和力和动力学测量。这些系统主要基于光学现象技术——表面等离子体共振(surface plasmon resonance, SPR)和生物层干涉(biological layer interference, BLI),能够以实时监测的方式直接检测和测量分子间的相互作用。

SPR是通过传感器芯片跟踪信号的变化来检测分子相互作用的极其敏感的方法。SPR信号被定义为折射率变化,这是指响应单元(Ru)大致相当于1pg / mm 2的蛋白质的表面浓度。在两个分子之间的相互作用期间绘制SPR信号导致传感图,这可以实时可视化(图1)。一般结合响应包括三个阶段:关联,平衡和解离;使用数学模型拟合这些传感器数据允许科学家计算关联(KA)和解离(KD)速率常数并最终确定结合亲和力(KD)。不同于等温度热量测定法(ITC),测量基于平衡点的抗体结合亲和力,SPR可以获得完整的动力学参数,以评估关联和解离以及抗体亲和力的所有效果。

抗体亲和力测量">图1. SPR成像过程</p>
    <p>在抗体亲和力测量中,首先将高亲和力抗igg抗体固定在传感器芯片表面捕获待分析抗体。然后,一系列浓度的抗原依次在表面注射。根据传感器曲线,人们可以根据动力学参数对抗体进行排序,并选择自己喜欢的最佳特性的单克隆抗体。与紧结合抗体的发现相比,特异性抗徳赢原表位的识别在药物发现中更有前景,因为结合亲和力可以通过标准的蛋白质工程方法成熟。因此,基于双价分析模型,即两种结合反应,我们能够提供侦察实验来识别与两个不同抗原表位结合的抗体。首先,将一种通用抗抗体(如兔抗小鼠免疫球蛋白)共价附着在芯片表面,然后将第一抗体由先前附着的通用抗体捕获。阻断不饱和位点后,注入的抗原将与第一抗体结合,形成Ab-Ag复合体。然后给药第二个单克隆抗体,用于评估结合亲和力,如果第二个抗体与一个单独的表位结合,将观察到一个独特的传感器曲线。(图2)</p>
    <p class=抗体亲和力测量">图2. Epitope映射中的主要步骤。①第一抗体捕获。②嵌段不饱和位点。③与抗原相互作用。④用第二抗体引入⑤冲洗和再生</p>
    <p>vwinCreative Biolabs可以提供定制的抗体亲和力测量,也可以实时确定任何分子间的相互作用(分子质量不小于100),而不需要标记。所有的数据分析将被执行和记录。请随时联系我们以获得详细的报价。</p>
    <p class=参考

  1. Abdiche, Yasmina N.等人。"探索使用Octet, ProteOn和Biacore生物传感器的阻断检测"分析生物化学386.2(2009): 172 - 180。
  2. 丰盛,斯蒂芬,保罗伦纳德和理查德·奥卡尼迪。使用表面等离子体共振测量抗体 - 抗原结合动力学。“抗体工程:方法和协议,第二版(2012):411-442。

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